Tris缓冲液作为一种生物缓冲试剂,一直在生物化学研究中发挥着很大的作用。Tris生物缓冲液的用途非常广泛。它可在凝胶中采用Tris HCl缓冲体系以更好的稳定pH值;也能与甘氨酸构成缓冲体系在电泳缓冲液里稳定PH值;而且能作为核酸和蛋白质的溶剂。根据Tris缓冲液的低离子强度特点,对于形成线虫的中间纤维起到助力的作用。另外滴加EDTA后的Tris盐酸缓冲液能够用于DNA的稳定和存储;核酸电泳实验中一般常用到TAE缓冲液和TBE缓冲液,这是调节Tris Hcl溶液的PH值,然后替换成乙酸和硼酸获得的两种缓冲液。
Tris-HCl缓冲液:pH = 7.5 ~ 8.5;三磷酸缓冲液:pH = 5.0 ~ 9.0。
除Tris - HCL外,Tris缓冲液还有多种衍生化缓冲液:
TBS缓冲液=Tris-HCl+ NaCl+KCl,常用来清洗免疫染色组织或Western blotting中的Western blotting膜;
TBST缓冲液=Tris-HCl+NaCl+tween20,一种常用于Western Blotting的膜缓冲液;
TE缓冲液=Tris-HCl+EDTA,对DNA碱基具有保护作用,常用于DNA的稳定和储存;
TAE缓冲液=Tris碱+乙酸+EDTA,是一种广泛应用于短片段DNA电泳的缓冲体系;
TBE缓冲液=三碱基+硼酸+EDTA,适用于长期DNA电泳,对小片段有较好的分离效果。
Tris缓冲液的优点: ①因为Tris碱的碱性较强,所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液;②对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。
Tris缓冲液使用时需注意:①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大,缓冲液稀释十倍,pH值的变化大于0.1;②温度效应大,温度变化对缓冲液pH值的影响很大,所以一定要在使用温度下进行配制,室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃~4℃。 ③易吸收空气中的CO2,所以配制的缓冲液要盖严密封。④此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用,所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。